# Seventh Commission Directive of 1 March 1976 establishing Community methods of analysis for the official control of feedingstuffs (76/372/EEC) (repealed) EU Directive 1976/372 · adopted 1 March 1976 Seventh Commission Directive of 1 March 1976 establishing Community methods of analysis for the official control of feedingstuffs (76/372/EEC) (repealed) ## Introductory text Seventh Commission Directive of 1 March 1976 establishing Community methods of analysis for the official control of feedingstuffs (76/372/EEC) (repealed) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex: DETERMINATION OF AFLATOXIN B1 ### Division A: ONE-DIMENSIONAL THIN LAYER CHROMATOGRAPHIC METHOD ## 1 Purpose and scope . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 Principle . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 3: Reagents ## 3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.8 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.11 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.12 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.13 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.14 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.15 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.16 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.17 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.18 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.18.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.18.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.18.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.18.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.18.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4: Apparatus ## 4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.8 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.11 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.12 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5: Procedure ## 5.1 Preparation of the sample (see under‘Observations’, Part C, point 1). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.2 Extraction . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.3 Column clean-up . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.4 Thin-layer chromatography . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5 Quantitative determinations . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5.1 Visual measurements . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5.2 Measurements by fluorodensitometry . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.6 Confirmation of the identity of aflatoxin B 1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.6.1 Treatment with sulphuric acid . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5.6.2: Two-dimensional chromatography involving the formation of aflatoxin B1-hemiacetal (aflatoxin B2a) ## 5.6.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.6.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.6.2.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 6: Calculation of the results ## 6.1 From the visual measurements . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.2 From the fluorodensitometric measurements . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7: Preparation and testing of the standard solution (3.16) ## 7.1 Determination of the concentration of aflatoxinB1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.2 Testing of chromatographic purity . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8 Repeatability . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9 Reproducibility . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division B: DETERMINATION OF AFLATOXIN B1. HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHIC METHOD ## 1 Purpose and scope . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 Principle . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 3: Reagents ## 3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.5.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.5.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.5.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.8 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.11 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.12 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.12.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.13 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.13.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.13.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.13.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.13.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.14 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.14.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.15 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.15.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.15.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4: Apparatus ## 4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.8 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.11 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.12 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.13 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.14 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.15 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.16 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.17 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.18 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.19 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.20 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.21 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.22 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.23 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.24 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.24.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.24.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5: Procedure ## 5.1 Preparation of the sample. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.2 Test portion. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.3 Extraction . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5.4: Clean-up (the procedure should be carried out without significant interruptions). ### Division 5.4.1: Florisil SEP-PAK purification ## 5.4.1.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.4.1.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5.4.2: C18 SEP-PAK purification ## 5.4.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.4.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5 High performance liquid chromatography . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5.1 HPLC pump settings . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5.2 Post-column pump settings . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5.3 Fluorescence detector . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5.4 Injector . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5.5 Check of chromatographic separation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5.6 Check of the stability of the system . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5.7 Check of linearity . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5.8 Injection of sample extracts . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 6: Confirmatory test ## 6.1 Further treatment of the extract (5.4.2.2) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.2 Preparation of derivative and thin layer chromatography: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7 Calculation of results . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8 Repeatability: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9 Reproducibility: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 10: Observations ## 10.1 Precision . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10.2 Stabilization of chloroform (3.1) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10.3 Accuracy . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division C: OBSERVATIONS CONCERNING METHODS A AND B ## 1 Defatting . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 Reproducibility of the results for Method A . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## to Annex . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . --- Source: https://www.legislation.gov.uk/eudr/1976/372 (the official version) Page: https://openlegislation.uk/eu-directive-1976-372 Contains public sector information licensed under the Open Government Licence v3.0. 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