# Council Directive of 26 June 1990 on animal health conditions governing the movement and import from third countries of equidae (90/426/EEC) (repealed) EU Directive 1990/426 · adopted 26 June 1990 Council Directive of 26 June 1990 on animal health conditions governing the movement and import from third countries of equidae (90/426/EEC) (repealed) ## Introductory text Council Directive of 26 June 1990 on animal health conditions governing the movement and import from third countries of equidae (90/426/EEC) (repealed) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Chapter 1: General provisions ## 1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Chapter II: Rules for the movement of equidae ## 3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Chapter III: Rules for imports from third countries ## 11 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 12 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 13 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 14 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 15 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 16 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 17 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 18 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 19 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 20 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 21 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Chapter IV: Final provisions ## 22 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 23 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 24 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 25 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 26 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 27 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 28 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex A COMPULSORILY NOTIFIABLE DISEASES . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex B . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex C . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex D AFRICAN HORSE SICKNESS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1 COMPETITIVE ELISA FOR THE DETECTION OF ANTIBODIES TO AFRICAN HORSE SICKNESS VIRUS (AHSV) (PRESCRIBED TEST) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 1.1: Test procedure ### Division 1.1.1: Preparation of plates ## 1.1.1.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1.1.1.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 1.1.2: Control wells ## 1.1.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1.1.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1.1.2.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1.1.2.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1.1.3 Spot test method . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1.1.3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1.1.4 Serum titration method . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1.1.4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 1.1.5: Add 50 μl of guinea pig antisera, pre-diluted in blocking buffer, to all wells except the blank wells of the ELISA plate (all wells now contain a final volume of 100 μl). ## 1.1.5.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1.1.5.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1.1.5.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1.1.5.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1.1.5.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1.1.6 Chromogen . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1.1.7 Reading . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 1.2: Expression of results ## 1.2.1 Using a software package print out the optical density (OD) values, and the percentage inhibition (PI) for test and control sera based on the mean value recorded in the four guinea pig control wells. The data expressed as OD and PI values are used to determine whether the test has performed within acceptable limits. The upper control limits (UCL) and lower control limits (LCL) for the guinea pig control are between OD values 1,4 and 0,4 respectively. The end-point titre for the positive control based on 50 % PI should be 1 in 240 (within a range from 1 in 120 to 1 in 480). Any plate that fails to conform to the above criteria must be rejected. However, if the positive control serum titre is greater than 1 in 480 and the test samples are still negative then the negative test samples can be accepted. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1.2.2 The diagnostic threshold (cut-off value) for test sera is 50 % (PI 50 %). Samples recording PI values greater than 50 % are recorded as positive. Samples recording PI values lower than 50 % are recorded as negative. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 INDIRECT ELISA FOR THE DETECTION OF ANTIBODIES TO AFRICAN HORSE SICKNESS VIRUS (AHSV) (PRESCRIBED TEST) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 2.1: Test procedure ### Division 2.1.1: Solid phase ## 2.1.1.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2.1.1.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2.1.1.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2.1.1.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 2.1.2: Test samples ## 2.1.2.1 Serum samples to be tested, and positive and negative control sera, are diluted 1 in 25 in PBS + 5 % (w/v) skimmed milk + 0,05 % (v/v) Tween 20, 100 μl per well. Incubate for 1 hour at 37 °C. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2.1.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 2.1.3: Conjugate ## 2.1.3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2.1.3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 2.1.4: Cromogen/Substrate ## 2.1.4.1 Add 200 μl/well of chromogen/substrate solution (10 ml of 80,6 mM DMAB (dimethyl aminobenzaldehyde) + 10 ml of 1,56 mM MBTH (3-methyl-2-benzo-thiazoline hydrazone hydrochlorid) + 5 μl H2O2) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2.1.4.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 2.2: Interpretation of the results ## 2.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2.2.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2.2.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3 BLOCKING ELISA FOR THE DETECTION OF ANTIBODIES TO AFRICAN HORSE SICKNESS VIRUS (AHSV) (PRESCRIBED TEST) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 3.1: Test procedure ### Division 3.1.1: ELISA plates ## 3.1.1.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.1.1.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.1.1.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 3.1.2: Test samples and controls ## 3.1.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.1.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.1.3 Conjugate . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.1.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.1.5 Chromogen/Substrate . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.1.6 Reading . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 3.2: Interpretation of the results ## 3.2.1 Assay validation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.2.2 Cut-off calculation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.2.3 Interpretation of results . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . --- Source: https://www.legislation.gov.uk/eudr/1990/426 (the official version) Page: https://openlegislation.uk/eu-directive-1990-426 Contains public sector information licensed under the Open Government Licence v3.0. 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