# Commission Regulation (EC) No 273/2008 of 5 March 2008 laying down detailed rules for the application of Council Regulation (EC) No 1255/1999 as regards methods for the analysis and quality evaluation of milk and milk products (repealed) EU Regulation No 273/2008 · adopted 5 March 2008 Commission Regulation (EC) No 273/2008 of 5 March 2008 laying down detailed rules for the application of Council Regulation (EC) No 1255/1999 as regards methods for the analysis and quality evaluation of milk and milk products (repealed) ## Introductory text Commission Regulation (EC) No 273/2008 of 5 March 2008 laying down detailed rules for the application of Council Regulation (EC) No 1255/1999 as regards methods for the analysis and quality evaluation of milk and milk products (repealed) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Chapter I: GENERAL PROVISIONS ## 1 Subject matter and scope . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 Routine methods . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Chapter II: METHODS OF ANALYSIS ## 3 Evaluation of compliance of a consignment with a legal limit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4 Sensory evaluation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5 Tracers . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6 Detection of cows’ milk casein . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7 Detection of coliforms . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8 Determination of the lactose content . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9 Detection of rennet whey . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10 Detection of buttermilk . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 11 Detection of antimicrobiotic residues . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 12 Determination of skimmed-milk powder content . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 13 Detection of starch . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 14 Determination of moisture content in dried cream . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 15 Determination of moisture content of acid buttermilk powder . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 16 Determination of milk fat purity . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Chapter III: GENERAL AND FINAL PROVISIONS ## 17 Quality assurance . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 18 Sampling and disputes over the results of analysis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 19 Transition period . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 19a Notifications . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 20 Repeals . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 21 Entry into force . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Signature . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex I: (Article 1) ## LIST OF REFERENCE METHODS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex II: (Article 3) ### Division: EVALUATION OF COMPLIANCE OF A CONSIGNMENT WITH THE LEGAL LIMIT ## 1 PRINCIPLE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 THE METHOD IS VALIDATED THROUGH INTERNATIONAL COLLABORATION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3 IN-HOUSE VALIDATION WITH CALCULATION OF INTERNAL REPRODUCIBILITY STANDARD DEVIATION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex III: (Article 4) ### Division: EVALUATION OF ASSESSORS AND THE RELIABILITY OF RESULTS IN SENSORY ANALYSES ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## A DETERMINATION OF THE ‘REPEATABILITY INDEX’ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## B DETERMINING THE ‘DEVIATION INDEX’ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## C COMPARISON OF THE RESULTS OBTAINED IN DIFFERENT REGIONS OF A MEMBER STATE AND IN DIFFERENT MEMBER STATES . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex IV: (Article 4) ### Division: SENSORY EVALUATION OF BUTTER ## 1 SCOPE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 DEFINITIONS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3 TEST ROOM . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4: SELECTION OF ASSESSORS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5 REQUIREMENTS FOR THE PANEL . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6 PERFORMANCE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7 SAMPLING AND PREPARATION OF THE SAMPLE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8: ASSESSMENT OF THE VALUE OF EACH ATTRIBUTE ## 8.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9 SUPERVISION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10 NOMENCLATURE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 11 REFERENCE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex V: (Article 5) ### Division: DETERMINATION OF THE CONTENT OF ENANTHIC ACID TRIGLYCERIDE IN BUTTER, BUTTER-OIL AND CREAM BY GAS CHROMATOGRAPHIC ANALYSIS OF TRIGLYCERIDES ## 1 SCOPE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 TERMS AND DEFINITION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3 PRINCIPLE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4: REAGENTS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5: APPARATUS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.7.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.7.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.7.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.8 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6 SAMPLING . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7: PROCEDURE ### Division 7.1: Preparation of the test sample and test portion ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7.1.1: Butter-oil, Butter ## 7.1.1.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1.1.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1.1.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7.1.2: Cream ## 7.1.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1.2.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1.2.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1.2.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1.2.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7.2: Preparation of the calibration standards ## 7.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.2.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.2.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.2.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7.3: Chromatographic determination ## 7.3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.3.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8: CALCULATION OF RESULTS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8.1: Calibration ## 8.1.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.1.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.1.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.2 Test samples . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 9: PRECISION ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.1 Repeatability . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.2 Reproducibility . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 10: TOLERANCE LIMITS: LOWER LIMITS (CASE OF INSUFFICIENT QUANTITIES) ## 10.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 10.2: Butter and concentrated butter ## 10.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 10.3: Cream ## 10.3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10.3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 11: TOLERANCE LIMITS: UPPER LIMITS (CASE OF EXCEEDING QUANTITY BY MORE THAN 20 %) ## 11.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 11.2: Butter and concentrated butter ## 11.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 11.3: Cream ## 11.3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 12: ADDITIONAL INFORMATION: STATISTICAL ANALYSIS OF RESULTS ON THE DETERMINATION OF TRIENANTOATE IN BUTTERFAT BY TRIGLYCERIDE ANALYSIS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Tests for outliers: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Precision parameters . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division: Figure 1 ### Division: Experimental results: Sample A ### Division: Experimental results: Sample B ### Division: Experimental results: Sample C ### Division: Experimental results: Sample D ## Annex VI: (Article 5) ### Division: DETERMINING THE VANILLIN CONTENT IN CONCENTRATED BUTTER, BUTTER OR CREAM BY HIGH-PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY ## 1 SCOPE AND FIELD OF APPLICATION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 PRINCIPLE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 3: APPARATUS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4: REAGENTS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.5.1 Vanillin stock solution (= 500 μg/ml) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.5.2 Vanillin standard solution (= 10 μg/ml) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.5.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.5.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.5.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.5.6 HPLC mobile phase . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5: PROCEDURE ### Division 5.1: Preparation of the test sample ## 5.1.1 Butter . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.1.2 Concentrated butter . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.1.3 Cream . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.2 Preparation of the test solution . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.3 Calibration . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.4 Determination by HPLC . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6 CALCULATION OF THE RESULTS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7: ACCURACY OF THE METHOD ## 7.1 Repeatability (r) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.2 Reproducibility (R) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8: TOLERANCE LIMITS ## 8.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 9: NOTES ## 9.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex VII: (Article 5) ### Division: DETERMINING THE ETHYL ESTER OF BETA-APO-8'-CAROTENIC ACID IN CONCENTRATED BUTTER AND BUTTER BY SPECTROMETRY ## 1 SCOPE AND FIELD OF APPLICATION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 PRINCIPLE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 3: APPARATUS ## 3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4: REAGENTS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.1.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.1.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5: PROCEDURE ### Division 5.1: Preparation of the test sample ## 5.1.1 Concentrated butter . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.1.2 Butter . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.2 Determination . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.3 Calibration . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 6: CALCULATION OF THE RESULTS ## 6.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7: ACCURACY OF THE METHOD ### Division 7.1: Repeatability ## 7.1.1 Butter analysis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1.2 Concentrated butter analysis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7.2: Reproducibility ## 7.2.1 Butter analysis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.3 Concentrated butter analysis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.4 Source of precision data . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8: TOLERANCE LIMITS ## 8.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8.2: Butter ## 8.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8.3: Concentrated butter ## 8.3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex VIII: (Article 5) ### Division: DETERMINING SITOSTEROL OR STIGMASTEROL IN BUTTER OR CONCENTRATED BUTTER BY CAPILLARY-COLUMN GAS CHROMATOGRAPHY ## 1 SCOPE AND FIELD OF APPLICATION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 PRINCIPLE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 3: APPARATUS ## 3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.8.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.8.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.8.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.8.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4: REAGENTS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.3.1.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.3.1.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.8.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.9.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5: METHOD ### Division 5.1: Preparation of standard solutions for chromatography ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.1.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.1.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5.2: Preparation of the unsaponifiables ## 5.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.2.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5.3: Preparation of trimethyl silyl ethers ## 5.3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5.4: Gas-chromatographic analysis ## 5.4.1 Choice of operating conditions . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.4.2 Analytical procedure . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 6: CALCULATION OF RESULTS ## 6.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7: ACCURACY OF THE METHOD ### Division 7.1: Butter ### Division 7.1.1: Repeatability ## 7.1.1.1 Stigmasterol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1.1.2 Sitosterol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7.1.2: Reproducibility ## 7.1.2.1 Stigmasterol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1.2.2 Sitosterol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1.3 Source of precision data . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7.2: Concentrated butter ### Division 7.2.1: Repeatability ## 7.2.1.1 Stigmasterol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.2.1.2 Sitosterol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7.2.2: Reproducibility ## 7.2.2.1 Stigmasterol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.2.2.2 Sitosterol . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.2.3 Source of precision data . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8: TOLERANCE LIMITS ## 8.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8.2: Butter ### Division 8.2.1: Stigmasterol ## 8.2.1.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.2.1.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8.2.2: Sitosterol ## 8.2.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.2.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8.3: Concentrated butter ### Division 8.3.1: Stigmasterol ## 8.3.1.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.3.1.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8.3.2: Sitosterol ## 8.3.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.3.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex IX: (Article 6) ### Division: REFERENCE METHOD FOR THE DETECTION OF COWS’ MILK AND CASEINATE IN CHEESES FROM EWES’ MILK, GOATS’ MILK OR BUFFALOS’ MILK OR MIXTURES OF EWES’, GOATS’ AND BUFFALOS’ MILK ## 1 SCOPE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 FIELD OF APPLICATION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 3: PRINCIPLE OF THE METHOD ## 3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4: REAGENTS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division: Isoelectric focusing ### Division 4.1: Reagents for production of the urea containing polyacrylamide gels ## 4.1.1 Stock gel solution . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.1.2 Gel solution . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4.1.3: Catalyst solutions ## 4.1.3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.1.3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.2 Contact fluid . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.3 Anode solution . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.4 Cathode solution . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division: Sample preparation ### Division 4.5: Reagents for protein isolation ## 4.5.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.5.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.5.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.6 Protein dissolving buffer . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4.7: Reagents for plasmin cleavage of caseins ## 4.7.1 Ammonium carbonate buffer . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.7.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.7.3 ε-Aminocaproic acid solution for enzyme inhibition . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4.8: Standards ## 4.8.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.8.2 Preparation of laboratory interim-standards of buffalos’ renneted milk containing 0 % and 1 % of cows’ milk . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division: Reagents for protein staining ## 4.9 Fixative . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.10 Destaining solution . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4.11: Staining solutions ## 4.11.1 Staining solution (stock solution 1) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.11.2 Staining solution (stock solution 2) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.11.3 Staining solution (working solution) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5: EQUIPMENT ## 5.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.8 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.11 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.12 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.13 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.14 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.15 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.16 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.17 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.18 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.19 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 6: PROCEDURE ### Division 6.1: Sample preparation ## 6.1.1 Isolation of caseins . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.1.2 Plasmin cleavage of β-caseins to intensify γ-caseins . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.2 Preparation of the urea containing polyacrylamide gels . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 6.3: lsoelectric focusing ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division: Conditions for isoelectric focusing: ## 6.3.1 Gel size 265 × 125 × 0,25 mm . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.3.2 Example of a voltage programme for an automatic electrophoresis device (2 gels of 5,0 × 4,5 cm), electrodes without strips applied directly to the gel . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 6.4: Protein staining ## 6.4.1 Protein fixation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.4.2 Washing and staining the gel plate . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.4.3 Destaining the gel plate . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7: EVALUATION ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1 Visual estimation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.2 Densitometric estimation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8 REFERENCES . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex X: (Article 7) ### Division: REFERENCE METHOD FOR DETECTING COLIFORMS IN BUTTER, SKIMMED-MILK POWDER, CASEIN AND CASEINATES ## 1 PREPARATION OF SAMPLES . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 PROCEDURE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3 RESULTS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex XI: (Article 8) ### Division: DETERMINATION OF LACTOSE IN COMPOUND FEEDINGSTUFFS ## 1 SCOPE AND FIELD OF APPLICATION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 REFERENCE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3 DEFINITION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4 PRINCIPLE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5: REAGENTS ## 5.1 General . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.2 Lactose . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.3 Concentrated Biggs/Szijarto solution . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.4 Diluted Biggs/Szijarto solution . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5 Preparation of HPLC grade water . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 6: APPARATUS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.1 HPLC ion exchange resin column . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.2 Guard column . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.3 Column oven . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.4 HPLC pump . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.5 HPLC injection device . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.6 HPLC detector . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.7 Integrator . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.8 Water purification unit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.9 Solvent filtration unit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.10 Analytical balance . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.11 Water bath . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.12 Centrifuge . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.13 Volumetric flask 50 mL . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.14 Volumetric flask 100 mL . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.15 Graduated pipette . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7 SAMPLING . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8: PREPARATION OF LACTOSE STANDARD SOLUTION ## 8.1 Standard 1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.2 Standard 2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 9: PREPARATION OF THE TEST SAMPLE ## 9.1 Reconstitution of the sample . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.2 Sample treatment . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 10: HPLC DETERMINATION ### Division 10.1: Preliminary preparation of HPLC ## 10.1.1 Installation of the column and pre-column . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10.1.2 Detector and initial flow . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10.1.3 Column oven and final flow-rate . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10.1.4 Integration . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10.1.5 Guard column test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10.2 Running standards . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10.3 Running samples . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 11: CALCULATION AND EXPRESSION OF THE RESULTS ## 11.1 Calibration . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 11.2 Samples . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 12: PRECISION ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 12.1 Repeatability . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 12.2 Reproducibility . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 13: REFERENCES ## Annex XII: (Article 9) ### Division: DETECTION OF RENNET WHEY IN SKIMMED-MILK POWDER FOR PUBLIC STORAGE BY DETERMINATION OF CASEINOMACROPEPTIDES HIGH-PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC) ## 1 SCOPE AND FIELD OF APPLICATION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 REFERENCE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3 DEFINITION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4 PRINCIPLE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5: REAGENTS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.1 Trichloroacetic acid solution . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.2 Eluent solution, pH 6,0 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.3 Flushing solvent . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5.4: Standard samples ## 5.4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.4.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 6: APPARATUS ## 6.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.8 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.11.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.11.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.11.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.11.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.11.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.11.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7: SAMPLING ## 7.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8: PROCEDURE ## 8.1 Preparation of the test sample . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.2 Test portion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8.3: Removal of fat and proteins ## 8.3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.3.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8.4: Chromatographic determination ## 8.4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.4.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8.5: Calibration ## 8.5.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.5.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.5.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 9: EXPRESSION OF RESULTS ### Division 9.1: Method of calculation and formulae ## 9.1.1 Calculation of the response factors R: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.1.2 Calculation of the relative area of the peaks in the sample [E] . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.1.3 Calculation of the relative retention time of peak III in sample [E]: RRTIII[E] = (RTIII[E])/(RTIII[5]) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.1.4 Experiments have shown that there is a linear relation between the relative retention time of peak III, i.e. RRTIII [E] and the percentage of whey powder added up to 10 % . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.2 Calculation of the percentage of rennet whey powder in the sample: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 9.3: Accuracy of the procedure ## 9.3.1 Repeatability . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.3.2 Reproducibility . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 9.4: Interpretation ## 9.4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.4.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.4.3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.4.3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division: Skimmed-milk powder ### Division: Skimmed-milk powder ## Annex XIII: (Article 9) ### Division: DETERMINING RENNET WHEY SOLIDS IN SKIMMED-MILK POWDER AND THE MIXTURES REFERRED TO IN REGULATION (EC) No 2799/1999 ## 1 PURPOSE: DETECTING THE ADDITION OF RENNET WHEY SOLIDS TO: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 2: REFERENCES: INTERNATIONAL STANDARD ISO 707 ## 3 DEFINITION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4 PRINCIPLE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5: REAGENTS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.1 Trichloroacetic acid solution . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.2 Eluents A and B . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.3 Conservation of the column . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5.4: Standard samples ## 5.4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.4.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.4.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 6: APPARATUS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.8 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.11.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.11.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.11.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.11.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.11.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.11.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7: SAMPLING ## 7.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8: PROCEDURE ## 8.1 Preparation of the test sample . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.2 Test portion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8.3: Removal of fat and proteins ## 8.3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.3.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8.4: Chromatographic determination ## 8.4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.4.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.4.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.4.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8.5: Calibration ## 8.5.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.5.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8.5.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 9: EXPRESSION OF RESULTS ### Division 9.1: Method of calculation and formulae ## 9.1.1 Calculation of the response factor R: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.2 Calculation of the percentage of rennet whey powder in the sample . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 9.3: Accuracy of the procedure ## 9.3.1 Repeatability . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.3.2 Reproducibility . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.3.3 Linearity . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 9.4: Interpretation ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division Table 1: Ni –4,6 standard ## Annex XIV: (Article 10) ### Division: SKIMMED-MILK POWDER: QUANTITATIVE DETERMINATION OF PHOSPHATIDYLSERINE AND PHOSPHATIDYLETHANOLAMINE ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 1 PURPOSE AND FIELD OF APPLICATION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 DEFINITION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3 PRINCIPLE OF THE METHOD . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4: REAGENTS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4.1: Standard material: PEDP, at least 99 % pure ### Division 4.2: Reagents for standard sample and test sample preparation ## 4.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.2.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4.3: Reagents for o-phthaldialdehyde derivatisation ## 4.3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.3.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.3.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4.4: HPLC elution solvents ## 4.4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.4.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.4.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.4.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.4.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.4.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.4.7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5: APPARATUS ## 5.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.8 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.11 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.12 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.13.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.13.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.13.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.13.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.13.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.13.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6 SAMPLING . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7: PROCEDURE ### Division 7.1: Preparation of the internal standard solution ## 7.1.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7.2: Preparation of the test sample solution ## 7.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.2.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7.3: Preparation of the external standard solution ## 7.3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.4 Preparation of the derivatising reagent . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7.5: Determination by HPLC ## 7.5.1 Elution solvents (4.4) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.5.2 Suggested eluting gradient: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.5.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.5.4 Column equilibration . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.5.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7.5.6: Perform the sequence of the chromatographic analyses keeping constant the run-to-run time in order to obtain constant retention times. Inject the external standard solution (7.3) every 5-10 test sample solutions in order to calculate the response factor 0 ### Division 7.6: Integration mode ## 7.6.1 PEDP peak . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.6.2 Tryptamine peak . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.6.3 PS and PE peaks groups . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8 CALCULATION AND EXPRESSION OF RESULTS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 9: ACCURACY OF THE METHOD ## 9.1 Repeatability . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.2 Reproducibility . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 10: REFERENCES ## 10.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex XV: (Article 11) ### Division: DETECTION OF ANTIMICROBIAL RESIDUES IN SKIMMED MILK POWDER ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Positive results are to be interpreted as follows: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex XVI: (Article 12) ### Division: QUANTITATIVE DETERMINATION OF SKIMMED-MILK POWDER IN COMPOUND FEEDINGSTUFFS BY ENZYMATIC COAGULATION OF PARA-CASEIN ## 1 PURPOSE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 SCOPE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 3: PRINCIPLE OF THE METHOD ## 3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4: REAGENTS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5: APPARATUS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.8 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.11 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.12 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 6: PROCEDURE ## 6.1 Preparation of the sample . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 6.2: Dissolving of milk powder and separation of the insoluble residue ## 6.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.2.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.2.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 6.3: Coagulation of casein with the enzymes of rennet ## 6.3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.3.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.3.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 6.4: Determination of casein nitrogen ## 6.4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7: BLANK TEST ## 7.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8: EXPRESSION OF RESULTS ## 8.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 9: ACCURACY OF THE METHOD ## 9.1 Repeatability . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.2 Reproducibility . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 10: OBSERVATIONS ## 10.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex XVII: (Article 13) ### Division: DETECTION OF STARCH IN SKIMMED-MILK POWDER, DENATURED MILK POWDER AND COMPOUND FEEDINGSTUFFS ## 1 SCOPE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 PRINCIPLE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 3: REAGENTS ## 3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4: APPARATUS ## 4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5 PROCEDURE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6 EXPRESSION OF RESULTS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7 REMARKS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex XVIII: (Article 14) ### Division: DETERMINATION OF MOISTURE CONTENT IN DRIED CREAM ## 1 SCOPE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 TERMS AND DEFINITIONS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3 PRINCIPLE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4: APPARATUS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5 SAMPLING . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6 PREPARATION OF TEST SAMPLE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7: PROCEDURE ### Division 7.1: Preparation of the dish ## 7.1.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.2 Test portion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7.3: Determination ## 7.3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.3.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.3.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 8: CALCULATION AND EXPRESSION OF RESULTS ## 8.1 Calculation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 9: PRECISION ## 9.1 Repeatability . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.2 Reproducibility . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10 TEST REPORT . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex XIX: (Article 15) ### Division: DETERMINATION OF MOISTURE IN ACID BUTTERMILK POWDER ## 1 SCOPE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 PRINCIPLE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 3: APPARATUS ## 3.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4 PROCEDURE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5 CALCULATION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 6: PRECISION ## 6.1 Repeatability limit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.2 Reproducibility limit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6.3 Source of precision data . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex XX: (Article 16) ### Division: REFERENCE METHOD FOR THE DETERMINATION OF MILK FAT PURITY BY GAS CHROMATOGRAPHIC ANALYSIS OF TRIGLYCERDIES — REVISION 2 ## 1 SCOPE AND FIELD OF APPLICATION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 DEFINITION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3 PRINCIPLE OF THE METHOD . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 4: REAGENTS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.2.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.2.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4.7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5: APPARATUS ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.1 High-temperature gas chromatograph . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 5.2: Chromatography column ## 5.2.1 Packed column . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.2.2 Capillary column . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.8 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.9 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.10 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.11 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.12 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.13 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.14 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.15 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 5.16 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 6 SAMPLING . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7: PROCEDURE ### Division 7.1: Preparation of test samples ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1.1 Isolation from butter or butteroil . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1.2 Extraction according to the Röse–Gottlieb gravimetric method . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.1.3 Extraction from milk using silica gel columns . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.2 Preparation of sample solution . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7.3: Chromatographic triglyceride determination ## 7.3.1 Baseline drift . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7.3.2: Injection technique ## 7.3.2.1 Packed column . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.3.2.2 Capillary column . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7.3.3: Calibration ## 7.3.3.1 General . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.3.3.2 Commercial milk fat standard . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.3.3.3 Laboratory milk fat standard . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 7.3.4: Chromatographic conditions ## 7.3.4.1 Packed column . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 7.3.4.2 Capillary column . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 8 INTEGRATION, EVALUATION AND CONTROL OF THE ANALYTICAL PERFORMANCE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 9: CALCULATION AND EXPRESSION OF RESULTS ### Division 9.1: Triglyceride composition ## 9.1.1 Calculation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.1.2 Expression of test results . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 9.2: S-values ### Division 9.2.1: Calculation ## 9.2.1.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.2.1.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.2.1.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.2.1.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.2.1.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.2.1.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.2.2 Expression of test results . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 9.3 Detection of foreign fat . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ### Division 10: PRECISION ## 10.1 Interlaboratory test . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10.2 Repeatability . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 10.3 Reproducibility . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 11 UNCERTAINTY OF MEASUREMENT . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 12 TEST REPORT . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## ANNEX A (normative) PREPARATION OF THE PACKED COLUMN A.1 REAGENTS AND APPARATUS A.1.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A.1.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A.1.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A.1.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A.1.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A.1.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A.1.6.1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A.1.6.2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A.1.6.3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A.1.6.4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A.1.6.5 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A.1.6.6 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A.1.6.7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A.2 SILANIZATION (DEACTIVATION OF THE GLASS SURFACE) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A.3 FILLING . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A.4 CONDITIONING . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## ANNEX B (informative) QUANTIFICATION OF THE FOREIGN FAT CONTENT B.1 GENERAL . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . B.2 CALCULATION . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . B.3 EXPRESSION OF TEST RESULTS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Bibliography . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex XXI: (Article 18) ### Division: PROCEDURE APPLICABLE WHEN THE RESULTS OF AN ANALYSIS ARE DISPUTED (CHEMICAL ANALYSIS) ## 1 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 3 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## 4 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ## Annex XXII CORRELATION TABLE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . --- Source: https://www.legislation.gov.uk/eur/2008/273 (the official version) Page: https://openlegislation.uk/eu-regulation-2008-273 Contains public sector information licensed under the Open Government Licence v3.0. Source: legislation.gov.uk, The National Archives.